第十題，實驗設計題。請同學們閱讀一篇材料。

核酸限制性內切酶是重組DNA技術中最重要的工具酶之一，它是一類能識別雙鏈DNA中特定鹼基序列，內切方式水解DNA鏈的核酸水解酶。最適合基因工程操作的限制內切酶為第二類內切酶，這類酶的一個重要特點是切割的斷裂點都在反轉重複序列上，亦稱迴文式序列，如：

EcoR I

5’-G↓AATT C-3’

3’-C TTAA↑G-5’

BamH I

……

請設計一個質粒DNA的限制性內切酶酶解鑑定實驗。

‘還好我做過核酸的其他實驗，這個核酸限制性內切酶的實驗設計，編吧！’

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蘭傑並沒有親手做過限制性內切酶的實驗，他也很想做啊，然而限制內切酶是昂貴的生化試劑，教練不給他做。

這個時候，蘭傑只能依靠類似實驗的操作經歷及豐富的理論知識儲備，進行合理的編排。

第一步，酶切反應。

第二步，電泳凝膠板的製備。

第三步，電泳加樣。

第四步，電泳與鑑定。

蘭傑首先設計出四個主要的實驗步驟。

需要的實驗材料包括：質粒DNA、反應緩衝液、BSA、限制性內切酶……

需要的實驗器材包括：電泳槽與電泳儀、紫外檢測儀、電熱恆溫水浴箱……

然後就是細化每一個步驟，寫出具體的實驗操作細節。

‘設計完了，理論上應該是可行的。’

蘭傑從頭到尾檢查一遍試卷，剛檢查完，鈴聲響起，交卷。

明天將進行實驗考試，雷天剛對他的隊員們說：“理論考試自我感覺良好的同學，可以和我們教練團隊溝通一下理論考試的情況。自我感覺一般的同學，你們回宿舍好好休息，調整狀態，積極備戰明天的實驗考試。”

雷天剛說罷，有一半的隊員回去休息了，剩下的一半隊員跟教練們對答案。

“對對對！我是這麼寫的！”

“哈哈！我又做對一題！”

“啊？錯了？”

“又錯了？”

“第六題之後，我全錯？”

“我特麼心態崩了啊！”

……

在競賽尚未全部結束的時候對答案，存在一定風險。

自我感覺良好的同學對完答案後發現準確率較高，他們的自我感覺當然會更加良好，信心和士氣倍增，有利於明日的實驗賽。

反之則炸裂。

“這麼看來，我的理論分數不會低於95分？”對完理論題的答案之後，蘭傑發現他的感覺蠻準確的啊，如果能獲得不低於理論分95%的分值，就非常可觀。

“而我的理論分不會高於50分，我撲街了，我不想參加實驗賽了……”高二的某位隊員唉聲嘆氣，心情極為低落。

能入選羊中生競隊的學生都是生物領域的尖子生，正常情況下，這些尖子生交了卷，在沒有對答案之前，對於自己分數的估值基本上是八九不離十。

對完答案，實際值是預期值的80%~90%，這很常見，大部分學生的估分準確率在這個區間內。

估90分，考了30分。或者估30分，考了90分。這兩種極端情況都很少見。

羊中生競隊的這位高二學生考完了理論題，自我感覺極其良好，他自我感覺能考到90分，對完答案後發現，他的實際值有很大機率不會超過50分。

高二的學弟還是太年輕，年輕人富於激情、持有樂觀心態是好事，但被過量的激情衝昏了頭腦或盲目樂觀，就會傷到自己。

蘭傑勸慰道：“學弟，你讀高二的時候就入選了我們羊中生競隊，來到國決賽場，已經很了不起了。你明年還有機會，並且我堅信，你明年一定會變的更強。所以你一定要振作起來，我們羊中的學生輸分不輸人，你必須參加明天的實驗賽，這是一次寶貴的經歷。你明年再來國決賽場，那就是有實戰經驗的老將了。”

“蘭傑學長，你講的很對，我剛才也就是說說氣話，我肯定要參加明天的實驗賽。一方面是積累國決經驗，另一方面，萬一其他選手的實驗賽發揮失常，而我超水平發揮，那我就有機會翻盤呀！”年輕人畢竟是年輕人，從樂觀到悲觀，再由悲觀迴歸樂觀，不過是幾秒鐘的事情而已。再度樂觀的高二學弟並未放棄希望，他寄希望於其他選手犯錯誤、給機會。

蘭傑樂了：“哈哈，學弟你能這麼想，可太正確了！你就等著吧，等待其他選手給機會。我相信，一定會有人給機會的。”

學科競賽是個人秀，主辦方頒發的只有個人獎項。

某某省或某某中學拿了幾個獎，誰家的競賽實力最強，那是非官方性質的民間統計。

每年的生競國決按比例頒發六七十個國一獎，平均到每個省，也就兩個國一獎。

每個省有那麼多所中學、那麼多個學生，所以拿到國一獎是很難很難的。

競爭對手不僅僅只有外校或外省的學生，就說蘭傑他們的羊中生競隊吧，蘭傑與羊中其他同學是隊友，同時也是競爭對手。

國決又不計算團隊總分，這意味著隊友並沒有什麼價值。

作為競爭對手，隊友的價值反而更高。

講道理，沒人願意逆風。但因為上半場發揮的很差，不得已陷入逆風局，這也經常發生。

逆風的選手，全都希望逆風翻盤。高二學弟是這種人，類似高二學弟的選手有不少。

暫時處於順風局的蘭傑，他當然不會給機會讓逆風方翻盤。

次日，實驗賽。

實驗賽的滿分是100分，與理論賽持平。

精神抖擻的蘭傑來到指定的實驗室，檢查他的個人實驗器材與實驗試劑。

離心機、電泳槽、制膠板（瓊脂糖凝膠由主辦方提前制好）、染色液、乳膠手套，移液槍4支、槍盒、質粒提取的有關試劑、拓撲異構酶（0.5U/ul）、10*loading buffer、Marker DNA、酶的工作液、蒸餾水……這些是蘭傑的個人實驗器材與實驗試劑。

公用器材是微型紫外分光光度計、水浴鍋、紫外成像儀。

實驗要求選手們提取所給菌的質粒，設計實驗，驗證拓撲異構酶I的作用，寫出簡要的實驗設計思路，明確說明每個體系中溶液的配比……

這個分子生物學的實操實驗，與昨天理論賽的最後一道實驗設計題，有一定的相似之處啊！理論賽、實驗賽是有關聯的，國決的出題老師水平就是高呀。蘭傑立即開始設計實驗，他沒有做過一模一樣的實驗，但在羊中的生物實驗室，他做過原理相同、具體操作高度類似的實驗。